《人血紅蛋白檢測金標(biāo)試紙條法》（GA 765-2008）

人血紅蛋白檢測 金標(biāo)試劑條法
1   范圍
    本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了法醫(yī)生物物證檢驗(yàn)中通過金標(biāo)試劑條快速檢驗(yàn)人血紅蛋白（Hb）的檢驗(yàn)原理、材料準(zhǔn)備、操作方法、結(jié)果判定和檢驗(yàn)中的注意事項(xiàng)。
    本標(biāo)準(zhǔn)適用于從事法庭科學(xué)檢驗(yàn)中檢驗(yàn)鑒定的檢材是否含有人血紅蛋白的檢測。
2   規(guī)范性引用文件
    下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。
    GB/T 6682—2008  分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法
    GA 476 人血紅蛋白金標(biāo)檢驗(yàn)試劑條
3   原理
抗人血紅蛋白金標(biāo)試劑條的基本原理是金標(biāo)記雙抗體夾心法。
抗人血紅蛋白金標(biāo)試劑條分為三個(gè)區(qū)，即加樣區(qū)、反應(yīng)區(qū)和吸附區(qū)。吸附在加樣區(qū)的金標(biāo)記單克隆抗人血紅蛋白抗體與人血痕浸泡液（含有人血紅蛋白）反應(yīng)后，形成金標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物，并向試劑條吸附區(qū)擴(kuò)散，當(dāng)復(fù)合物擴(kuò)散至反應(yīng)區(qū)時(shí)，與吸附于此區(qū)的另一單克隆抗人血紅蛋白抗體結(jié)合（線狀），抗原抗體復(fù)合物聚集該處，形成紫紅色線（陽性反應(yīng)線）。過剩的復(fù)合物繼續(xù)向吸附區(qū)擴(kuò)散，與反應(yīng)區(qū)吸附的另一抗體（通常是羊抗鼠IgG）結(jié)合，也形成紫紅色線條（質(zhì)控線）。
如果浸泡液不含有人血紅蛋白，則加樣區(qū)就不能形成抗原抗體復(fù)合物，擴(kuò)散至反應(yīng)區(qū)的金標(biāo)抗人血紅蛋白抗體就不能與吸附于此區(qū)的另一單克隆抗人血紅蛋白抗體結(jié)合，也就沒有紫紅色線狀帶形成。當(dāng)它繼續(xù)向吸附區(qū)擴(kuò)散，可與反應(yīng)區(qū)另一吸附的羊抗鼠IgG結(jié)合，形成紫紅色線條（質(zhì)控線）。
4   試劑與器材
4.1 試劑
試劑包括：
a)人血紅蛋白金標(biāo)檢驗(yàn)試劑盒（符合GA 476的各項(xiàng)要求）；
b)純水（符合GB/T 6682—2008中規(guī)定的三級(jí)水）。
4.2器材
 器材包括：a)眼科剪；b)眼科鑷；c)淚囊穿刺針；d)加樣器及加樣器頭；e)1.5mL～2mL離心管；f)高速離心機(jī)。
5  操作步驟
5.1 檢材處理
5.1.1  取適量懷疑含有人血紅蛋白的檢材或適量懷疑是人的血液，放入1.5mL～2mL離心管中，加入約0.5mL純水。
5.1.2用淚囊穿刺針攪動(dòng)檢材，加速檢材的溶解；或置于振蕩器上振蕩，浸泡約30min。
5.1.3將此離心管置于高速離心機(jī)上，13000rpm 離心5min 。
5.1.4離心后將上清液移入另一個(gè)1.5mL～2mL離心管中。
5.2 檢測
5.2.1  將試劑盒剪開，取出檢驗(yàn)試劑條，將試劑條上帶有MAX標(biāo)記一端插入上清液中并計(jì)時(shí),或?qū)⑦m量檢材浸泡液滴加到試紙條吸附區(qū)。
5.2.2約5min 后取出試劑條，觀察結(jié)果。
6結(jié)果判斷
當(dāng)檢測線為紫紅色，質(zhì)控線也為紫紅色，則說明浸泡液中含有人血紅蛋白；當(dāng)檢測線未出現(xiàn)紫紅色，質(zhì)控線為紫紅色，則說明浸泡液中無人血紅蛋白；當(dāng)檢測線和質(zhì)控線均未出現(xiàn)紫紅色，說明此試劑條無效，應(yīng)換試劑條重新檢驗(yàn)。結(jié)果判斷示意圖見圖1。