DNA親子鑒定即STR分型檢測一般實(shí)驗(yàn)對樣本的要求:細(xì)胞數(shù)量≥106個,DNA含量>20ng/μl,體積大于20μl。對于人體組織塊樣本是怎樣提取DNA的呢?
a) 取適量組織塊,用純水沖洗;
b) 剪碎(或研磨成碎塊),加入1 mL STE提取液(100 mmol/L NaCl,10 mmol/L Tris-HCI,1 mmol/LEDTA,pH8.0),混勻后加入20% SDS 75 μL,10 mg/mL 蛋白酶K 40 μL,于56℃酶解至清;
c) 于1.5 mL離心管中加入200 μL 10% Chelex 100(100-200目),加入上述酶解后溶液20 μL,混勻;
d) 56℃保溫30 min;
e) 劇烈振蕩5-10 s;
f) 沸水煮8 min;
g) 劇烈振蕩5-10 s;10,000-15,000 r/min離心3 min;取上清液用于擴(kuò)增反應(yīng);
h) 2-8℃保存或凍存剩余DNA,再次使用時重復(fù)步驟g)。