檢測Amelogenin基因座鑒定性別，特別是根據(jù)XY同源的Amelogenin基因第一內(nèi)含子在X染色體上有6bp缺失的特征鑒定性別的方法，具有靈敏、快速、準確、對降解DNA樣本有效等特點，目前廣泛應(yīng)用于醫(yī)學、考古學、產(chǎn)前診斷等領(lǐng)域，但Santos RF等（1998）對DNA鑒定性別的方法的可靠性進行了研究后，對根據(jù)X，Y同源的Amelogenin基因鑒定性別的方法提出了質(zhì)疑。他對350例來自世界不同地區(qū)的無關(guān)正常男性DNA樣本進行了分子雜交和/或PCR擴增檢驗。發(fā)現(xiàn)其中2例來自斯里蘭卡的男性標本Y染色體短臂的靶序列缺乏陽性結(jié)果。通過探針雜交發(fā)現(xiàn)缺失包括DYS7/A，DYS7/B，92R7/A，LLY22g/A，B，C，F。通過交替使用多對探針及多對針對Amelogenin基因鑒定性別的引物，均僅擴增出X特異性片段。據(jù)此結(jié)果，他建議法醫(yī)DNA分析及產(chǎn)前鑒定胎兒性別宜采用復合擴增的方法，同步檢測Amelogenin基因及性別決定基因SRY（sex determing gene）更穩(wěn)妥?；痉椒ㄓ校?/span>
1. DNA用常規(guī)方法用有機法或Chelex 法提取。
2. Amelogenin基因引物用Amel A及Amel B，序列同前。SRY引物序列為：
F11 5′-ATA AGT ATC GAC CTC GTC GGA A-3′
R7 5′-GCA CTT CGC TGC AGA GTA CCG A-3′
3. 擴增體系為：反應(yīng)體積12.5ul,其中含1u金牌DNA聚合酶、引物各1umol/L,dNTP各200umol/L,1.5mmol/L MgCl2，人基因組DNA 10～20ng。循環(huán)程序為94℃ 10min后94℃ 20s、60℃ 20s、72℃ 40s，30個循壞后72℃保溫10min.
4. 擴增產(chǎn)物用T5%、C3% PAG電泳，膠長20cm、電泳緩沖液1×TBE，恒電流40mA電泳2h。銀染顯帶。正常女性僅有X特異性產(chǎn)物106bp，正常男性有Y特異性產(chǎn)物分別為112bp及93bp及X特異性產(chǎn)物106bp。而Amelogenin基因Y特異性片段缺失男性Y特異性產(chǎn)物僅93bp，X特異性產(chǎn)物為106bp。
