我們都知道小鼠是常見(jiàn)的模式生物,小鼠細(xì)胞系在實(shí)驗(yàn)室被使用的頻率僅次于人源細(xì)胞,并廣泛被應(yīng)用于人類疾病研究、重組蛋白工業(yè)和干細(xì)胞研究中。由于細(xì)胞是一種特殊的商品,它具有可復(fù)制性,很容易被一些商家自行復(fù)制后再出售,而這些自行傳代復(fù)制的細(xì)胞成本低廉,所以容易在市場(chǎng)上銷售傳播。但是細(xì)胞傳代的次數(shù)、培養(yǎng)的條件以及是否有交叉污染等都無(wú)法得到保障,甚至有老師買了細(xì)胞做完了大部份實(shí)驗(yàn)后,才發(fā)現(xiàn)細(xì)胞被污染了。因此近年來(lái),權(quán)威期刊為了避免因細(xì)胞錯(cuò)誤導(dǎo)致的科學(xué)數(shù)據(jù)失真問(wèn)題,普遍要求作者對(duì)所使用的細(xì)胞提供來(lái)源說(shuō)明和鑒定結(jié)果。細(xì)胞間用于檢測(cè)原代細(xì)胞與傳代細(xì)胞是否一致。人鼠細(xì)胞交叉污染檢測(cè)技術(shù),采用人鼠復(fù)合擴(kuò)增體系檢測(cè)人類細(xì)胞中的小鼠細(xì)胞污染,或鼠源細(xì)胞中的人類細(xì)胞污染情況。該方法能證明手上的小鼠細(xì)胞是否為單一來(lái)源,能鑒定有無(wú)發(fā)生其他細(xì)胞株或其他物種來(lái)源細(xì)胞的交叉污染。在文章發(fā)表的時(shí)候,附上這樣一份鑒定報(bào)告,說(shuō)明細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中一直維持原樣。
適用樣本類型
小鼠細(xì)胞沉淀,小鼠細(xì)胞懸液,小鼠細(xì)胞凍存液,小鼠細(xì)胞保存卡,小鼠細(xì)胞基因組
檢測(cè)位點(diǎn)
18-3、4-2、6-7、19-2、1-2、7-1、8-1、1-1、3-2、2-1、15-3、6-4、13-1、11-2、17-2、12-1、5-5、X-1。(18個(gè)小鼠細(xì)胞STR分型檢測(cè)位點(diǎn)。)
TH01、D5S818。(2個(gè)人源細(xì)胞STR分型檢測(cè)位點(diǎn)。)
檢測(cè)范圍
是否為小鼠細(xì)胞
是否存在人鼠交叉污染
對(duì)已公布數(shù)據(jù)的小鼠細(xì)胞進(jìn)行小鼠細(xì)胞株鑒定
報(bào)告類型
中文,或中英文報(bào)告
檢驗(yàn)方法簡(jiǎn)述
將小鼠細(xì)胞懸液或細(xì)胞沉淀用基因組提取試劑盒(艾基生物)抽提全基因組DNA,微量紫外可見(jiàn)分光
樣本要求
1、基因組DNA: OD 260/280 在1.8~2.0之間, 濃度≥30ng/μl,體積≥20μl;
2、新鮮細(xì)胞:
(1)細(xì)胞數(shù)≥1000000
(2)貼壁細(xì)胞經(jīng)胰蛋白酶消化后,使用1.5mL離心管離心收集細(xì)胞沉淀;
(3)懸浮細(xì)胞直接使用1.5mL離心管離心收集細(xì)胞沉淀;
(4)PBS清洗細(xì)胞沉淀,盡可能去除培養(yǎng)基與胰酶;
3、凍存細(xì)胞:細(xì)胞數(shù)≥1000000,凍存細(xì)胞從液氮罐中,37℃水浴復(fù)蘇,融化后使用1.5mL離心管離心收集細(xì)胞沉淀,盡可能去除凍存液,否則會(huì)影響DNA抽提質(zhì)量;