Chelex-100提取DNA的方法最早由Singer - Sam等1989年報(bào)道，Walsh等(1991)對(duì)該法在法醫(yī)物證檢材中的應(yīng)用進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。目前Chelex - 100提取DNA的方法已成為一種常規(guī)技術(shù)，廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)各個(gè)領(lǐng)域。
一、原理：Chelex - 100是以成對(duì)的亞氨基二乙酸鹽離子為吸附因子的苯乙烯與二乙基苯的共聚物，它對(duì)高價(jià)金屬離子有很高的親和力和螯合作用。在低離子強(qiáng)度、堿性及煮沸的條件下，可以使細(xì)胞膜破裂，并使蛋白質(zhì)變性，DNA游離。檢材及其基質(zhì)中含有大量的核酸酶和金屬離子，Chelex - 100螯合吸附了金屬離子后，能夠抑制核酸酶對(duì)DNA的消化作用，防止DNA在煮沸過程中的降解作用，同時(shí)在高溫、低離子強(qiáng)度條件下，還有催化DNA釋放的作用。這樣的處理過程既達(dá)到了分離提取DNA分子的目的，同時(shí)除去了一些對(duì)擴(kuò)增反應(yīng)有抑制作用的因子（如重金屬離子）。
二、基本操作步驟及方法：Chelex - 100提取法廣泛應(yīng)用于微量血液、組織塊、精斑、毛根、唾液斑、骨骼及牙齒等物證檢材的DNA提取，提取的DNA十分適合用作PCR模板，本節(jié)以微量血液為例，其他檢材右關(guān)內(nèi)容將在第4節(jié)敘述。
基本操作步驟：
（一）取血液l~5出，加入1.5ml離心管中，加入Iml純水，室溫下震蕩混勻15—30min。
（二）10000一12000r/min離心2~3min，棄上清。必要時(shí)用純水洗滌1—2次；
（三）室溫下12000r/min離心3min，棄去上清，留下沉淀。
（四）在離心管中加入200pl懸浮好的5010 Chelex - 100溶液，在56℃水浴中溫浴30min以上，震蕩溶液5~ 10s。
（五）100 aC溫浴8min，取出后高速震蕩溶液5～10s。
（六）室溫下12000r/min離心3min。上清即為用于PCR反應(yīng)的DNA樣品。4。20C保存?zhèn)溆谩?/div>
注意事項(xiàng)：
（一）本法僅適用于PCR反應(yīng)模板制備，提取后短時(shí)間之內(nèi)使用。
（二）操作中振蕩步驟需要充分。
（三）滅菌去離子水破碎紅細(xì)胞后，離心沉淀仍很紅，可再加Iml滅菌去離子水充分振蕩、離心，直至上清液無色。
（四）可適當(dāng)延長(zhǎng)56℃溫浴時(shí)間。
（五）基因組DNA是在上清液中，通常情況下在501ul擴(kuò)增體系中加入1。51ul樣品足以滿足PCR反應(yīng)的需要，具體加多少取決于起始檢材量。
（六）Chelex - 100使用終濃度一般為5%, pH值應(yīng)在10。11之間，如果pH值有改變應(yīng)試用，不應(yīng)人為調(diào)整Chelex - 100的pH值。
（七）Chelex - 100放置后會(huì)沉淀，使用前必須混勻，用Chelex - 100提取的DNA模板如PC置時(shí)間長(zhǎng)或從一個(gè)實(shí)驗(yàn)室攜帶到另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)，擴(kuò)增前應(yīng)混勻后再離心，取上清液。PCR反應(yīng)體系內(nèi)絕對(duì)不能含有Chelex - 100，否則Mg“會(huì)被螯合，使PCR擴(kuò)增失敗。
（八）Chelex - 100法提取DNA煮沸很關(guān)鍵，溫度、時(shí)間要足夠。
聲明：該文觀點(diǎn)僅代表作者本人.
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