DNA鑒定之毛發(fā)的DNA提取方法
2020-11-04 22:36:20 來源: 科鑒基因
毛發(fā)分毛根、毛干、毛尖三部分。毛根含有染色體DNA,但自然脫落的毛發(fā)根部含染色體DNA量極少。毛干部分含有線粒體DNA,隨著近年來測序技術(shù)的發(fā)展,通過毛干mtDNA測序作個體識別已經(jīng)成為較常見的技術(shù)。
(一)毛根DNA提取
1.有機提取法:
(1)取帶毛根的毛發(fā)1根用乙醚洗滌去油脂,乙醇清潔表面,干燥。
(2)將單個發(fā)根剪入1.5ml離心管中,加入100μl TES(100mmol/L NaCl,10mmol/L EDTA,10mmol/L Tris - HCl pH8.0)、10% SDS 10μl和10mg/ml蛋白酶K 1μl,混勻,55℃水浴2h或37℃溫浴過夜。
(3)用等體積飽和酚、酚/氯仿、氯仿各抽提一次。
(4)加1/10體積3mol/L醋酸鈉(pH5.2),2倍體積預(yù)冷無水乙醇,混勻,沉淀DNA。10000r/min離心10min,棄去上清。
(5)真空干燥,10μl消毒去離子水溶解DNA備用。
2.Chelex - 100提取法
將0.5cm發(fā)根剪入1.5ml離心管中,滅菌水、乙醇分別清洗兩次,晾干后加入5﹪Chelex - 100 50μl~100μl,以下步驟同Chelex - 100提取血液DNA。
3.直接煮沸法
將單個毛根剪入1.5ml離心管中,滅菌水、乙醇分別清洗兩次,晾干后加入50μl~100μl滅菌水,沸水煮10min,4℃?zhèn)溆谩?/div>
(二)毛干mtDNA提取
1.取lcm長毛干,用乙醇擦拭,放人1.5ml離心管中。
2.滅菌水、無水乙醇分別浸泡兩次,每次10min。
3.晾干后如入64μl TES(10mol/L Tris pH8.0,10mmol/L EDTA,100mmol/L NaCl),10﹪SDS 20μl,10mg/ml蛋白酶K8μl,1mmol/L DTT 8μl,混勻,37℃溫浴消化過夜。
4.待毛干消化完全后,等體積酚氯仿抽提,收集上清備用。
相關(guān)評論:
科鑒基因來自河北廊坊的客戶反饋:一年的毛發(fā)未檢測出,二歲多的小孩毛發(fā)樣本檢測出。
2015年做的個人親子鑒定,大人采集的帶毛囊的頭,但是放置了有一年多,小孩的二歲多,也采集的帶毛囊的頭發(fā),送到鑒定中心,說是最好提供五歲以上兩根拔起的毛發(fā),兩種樣本都是不符合標(biāo)準(zhǔn)要求的,樣本已經(jīng)送到鑒定中心,想檢測看看,一周左右,實驗完全,孩子的毛發(fā)樣本檢測到DNA數(shù)據(jù),大人的沒有檢測到,可能是放置的時間太長。之后2016年好不容易補到大人的毛發(fā)樣本,就很快送到鑒定中心。檢測得到大人的DNA數(shù)據(jù),與之前檢測的小孩的DNA數(shù)據(jù)比對,得到結(jié)果。
科鑒基因來自河北固安的客戶反饋:2根帶毛囊的頭發(fā)到北京做親子鑒定。
2016年做的個人親子鑒定,當(dāng)時只采集男方的兩根毛發(fā),毛囊很明顯,且能粘在紙上。到鑒定中心知道毛發(fā)要求五歲以上兩根拔起最少五根帶毛囊的。兩根有點少,如果檢測結(jié)果不夠,可以補樣加測或是重新檢測。一周左右,得到結(jié)果。
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