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DNA鑒定之有機(jī)溶劑提取法提取骨、牙組織的DNA

骨骼、牙齒由于有外部硬組織的保護(hù),因此能夠抵抗外界環(huán)境的影響,DNA不易被降解,在軟組織腐敗或炭化的情況下,從軟骨、骨骼、牙齒等硬組織中提取DNA是惟一的選擇。肌體軟組織高度腐敗肌肉變黑,甚至液化的情況下,從軟骨組織仍可能提取到DNA擴(kuò)增分型的模板,所以軟骨組織是理想的檢材。對于骨骼、牙齒樣本,宜選骨髓、牙髓,其次選擇干骺端、其他骨松質(zhì)豐富的部位,最后選擇骨密質(zhì)部分。

暴露在野外現(xiàn)場的骨骼、牙齒標(biāo)本首先要進(jìn)行清洗工作。將標(biāo)本用蒸餾水沖洗干凈、干燥,用滅菌細(xì)砂紙磨去骨外層部分,并在紫外燈下照射殺菌1~ 2h,以避免微生物或外源DNA的污染,再進(jìn)行以下步驟。
有機(jī)溶劑提取法:
1.較新鮮的骨骼
(1)鉆取骨粉(胃松質(zhì)10~20mg,骨密質(zhì)75~100mg)或取牙髓,分別用冷蒸餾水、乙醇、乙醚各浸泡15min;
(2)待完全干燥后加TES(15mmol/L Tris-HCl pH8.0,15mmol/L EDTA pH8.0,15mmol/LNaCl) 400μl,10% SDS 40μl,10mg/ml蛋白酶K 4μl,混勻。37℃溫浴過夜。
(3)飽和酚、氯仿抽提及冷乙醇沉淀,操作同血液DNA提取。應(yīng)該注意的是此方法對較新鮮骨、牙的DNA提取效果較好,對陳舊骨、牙檢材提取效果不佳。
2.陳舊骨骼
(1)取5g骨粉加入40ml 0.5mol/L EDTA pH8.0,4aC混勻24~48h。5000r/min離心15min,棄上清。
(2)用40ml提取緩沖液(0.5mol/L EDTA,0.5%蔗糖pH8.0)脫鈣。5000r/min離心15min,棄上清。
(3)加入提取緩沖液使終體系達(dá)7ml,再加入10mg/ml蛋白酶K 200μl,37℃孵育12h,追加10mg/ml蛋白酶K100μl,37℃再消化12h。
(4)酚、氯仿抽提及冷乙醇沉淀,操作同血液DNA提取。必要時(shí)用centricon柱層析法濃縮。
聲明:該文觀點(diǎn)僅代表作者本人.
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