平板電泳在法醫(yī)DNA分析應(yīng)用中已有30多年的歷史,并被證明為一種有效的分型技術(shù),但是近10年來,越來越多的實驗室已經(jīng)放棄了該技術(shù)。作為一種曾經(jīng)占有重要歷史地位的技術(shù),北京科鑒基因親子鑒定中心將對此進行簡要介紹。
平板電泳采用的是平板凝膠。平板凝膠由包含許多小孔的固態(tài)介質(zhì)和緩沖液組成,DNA分子的電泳過程是在凝膠中移動。凝膠成分混勻后倒入確定平板凝膠形狀的模具中。凝膠的一端插入樣本梳,在凝膠凝固后拔掉樣本梳,樣本梳的齒會在凝膠上留下一些小孔,用來加入DNA樣本。
目前在法醫(yī)DNA實驗室用于DNA分離的凝膠主要有兩種:瓊脂糖凝膠和聚丙烯酰胺凝膠。前者因有較大的孔徑常用于分離600~23 000bp的較大片段的DNA分子,后者則通常用于高效分離低于500bp的小片段DNA。限制性片段長度多態(tài)性( RFLP)方法就是使用瓊脂糖凝膠方法來分離片段的。由于商業(yè)化STR分型試劑盒的擴增片段常為100~400bp,瓊脂糖凝膠不能很好地分離,而用聚丙烯酰胺凝膠則可以獲得較好的分離效果。
正常條件下,DNA互補的雙鏈彼此結(jié)合在一起。對互補的雙鏈DNA進行分離的電泳稱為非變性凝胺電泳,而使DNA保持單鏈狀態(tài)進行分離的電泳則為變性凝膠電泳。一般來講,變性系統(tǒng)能更好地解決長度相似的DNA分子分離的問題,這是因為單鏈DNA比雙鏈DNA有更大的柔韌性,因此可以更有效地與凝膠的分子篩相互作用,從而達到更好的分離目的。自然狀態(tài)下的DNA分子經(jīng)常會形成空間二級結(jié)構(gòu),這一點在變性凝膠系統(tǒng)中也可以避免。為了得到變性系統(tǒng),常使用一些化學(xué)物質(zhì)(如甲酰胺和尿素),它們可與DNA的堿基形成氫鍵,從而阻止互補鏈的形成。此外,提高分離的溫度和溶液的pH也有助于保持DNA的單鏈狀態(tài)。
DNA鑒定之平板電泳分型技術(shù)
2020-11-04 22:36:21 來源: 法醫(yī)DNA分型
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