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DNA提取方法有哪些?親子鑒定用那種方法提DNA?

   親子鑒定的第一步就是樣本的DNA提取。DNA提取有哪些方法呢?DNA提取通常有三種提取方式:手工提取、半自動提?。ù媸止ぬ崛≈械囊恍┎襟E)和全自動提?。o需手工,放入檢材,取出提取好的DNA進行擴增)。

    一、手工提取

   1.Chelex-100提取法:Chelex-100是一種化學鰲合樹脂,由苯乙烯.二乙烯苯共聚體組成。其中含有的選擇性螯合二價離子,比普通離子交換劑具有更高的金屬離子選擇性和較強的結(jié)合力,能結(jié)合許多可能影響下一步分析的其他外源物質(zhì)。通過離心除去Chelex顆粒,使與Chelex-100結(jié)合的物質(zhì)與DNA分離,防止DNA降解。
   2.有機提取法:即經(jīng)典的飽和酚-氯仿法。它利用有機的蛋白質(zhì)變性劑酚、氯仿交替抽提,使蛋白質(zhì)變性,有效地去除蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。有機提取法能獲得較多的大片段DNA,比Chelex-100提取方法能更徹底地純化DNA。
   3.無機提取法:利用6mol·L-1 NaCl或醋酸鈉沉淀蛋白質(zhì)代替有機酚-氯仿抽提步驟去除蛋白質(zhì),其他過程同有機溶劑提取法。
    4.差異裂解法:主要用于混合精斑中的精子DNA提取。依據(jù)精子細胞膜和核膜含有大量硫醇蛋白,含有豐富的二硫鍵,利用這一特性可將罪犯和受害人的DNA分析分開,便于最后結(jié)果解釋。
   5.磁珠提取法:利用磁性硅膠吸附白細胞,用細胞裂解液裂解細胞,從細胞中游離出來的DNA分子被吸附到磁性顆粒表面,蛋白質(zhì)等分子不被吸附而留在溶液中。在磁場作用下,磁性顆粒與液體分開,回收顆粒,再用純水或TE洗脫吸附的DNA。
   6.硅珠提取法:在高濃度的硫氰酸胍的存在下,DNA被二氧化硅特異性地吸附,被吸附的DNA在沒有硫氰酸胍存在下,DNA又從二氧化硅中釋放出來。硫氰酸胍是高性能蛋白變性劑,可使蛋白質(zhì)與DNA分離,在硅珠吸附前高速離心可去除變性的蛋白質(zhì)等不溶物,吸附后的漂洗可去除溶液中PCR抑制物,DNA回收率高。
   二、半自動提取。 通常使用半自動提取儀,本文以南京微略MW-AP48核酸純化儀為例。特點如下:

   1.適用范圍廣:對全血、血卡、唾液卡、人體骨骼、組織、精斑、接觸性生物檢材等多種生物樣本均可分離出高質(zhì)量核酸。
   2.外形和內(nèi)部設(shè)計:設(shè)計小巧,注重細節(jié),外形美觀兼顧實用,給實驗室操作者帶來不一樣的體驗,采用圖形化用戶界面、觸控操作,可以新建、編輯和刪除程序,內(nèi)部可儲存多個程序,方便不同檢材的提取參數(shù)設(shè)置,并且實驗艙內(nèi)含有紫外消毒,避免再次提取時樣本污染。
   3.分離系統(tǒng):磁性分離系統(tǒng)由磁棒與磁套組成。
   4.快速便捷:具有獨立溫控加熱槽,帶紫外滅菌裝置,采用直線電機,能帶動磁力棒迅速對樣本攪拌和混勻,整個提取時間20~30分鐘,相當快速。還使用羥基磁珠,優(yōu)化了裂解緩沖條件,較硅珠法DNA回收效率提高1倍以上。
   5.獨立的配套試劑盒:包含手工提取使用的蛋白酶K、DTT和磁珠提取全套試劑,一個盒子滿足全套服務(wù)。
   6.樣品通量:1~48道,可以一次性處理48個樣品,處理體積20μL~1000μL, 操作靈活簡便,

     操作步驟如下:將處理好的檢材移入核酸提取儀配套預(yù)封裝試劑96孔深孔板中的樣本孔,打開儀器艙門,放入96深孔板和攪拌套,關(guān)閉艙門后啟動提取儀,提取儀首先可以對樣本加熱升溫進行細胞裂解,然后由磁棒和攪拌套來吸附磁珠并移至樣本孔,待磁珠上吸附了裂解釋放的核酸后,再通過磁棒和攪拌套將磁珠轉(zhuǎn)移至清洗孔。   核酸提取制備的整體步驟:

之后,將提取好的DNA加入到96孔板對應(yīng)孔中,再添加檢測試劑,具體方法按各廠家試劑盒說明書使用方法進行配置添加。試劑添加完畢后,使用封膜機將96孔板封上,然后放置到擴增儀上進行擴增,擴增程序按各廠家檢測試劑盒說明書上的擴增步驟進行設(shè)置,擴增時間按檢測試劑盒擴增時間算,擴增完成后經(jīng)傳遞窗口將樣本傳遞至測序室。測序室配置好相應(yīng)的試劑耗材,將擴增產(chǎn)物加入相應(yīng)的試劑耗材中,使用測序儀上樣電泳,待測序完畢后導出檢測圖譜,進行圖譜分析,便可以獲得嫌疑人或被害人DNA信息。
      三、全自動提取

      全自動核酸提取儀相對前兩者更加方便快捷,可實現(xiàn)放入檢材取出后直接擴增DNA,目前市面上已有多款產(chǎn)品,但設(shè)備價位較高是最大的限制因素。

     親子鑒定一般采用的是Chelex-100提取法提DNA。

聲明:該文觀點僅代表作者本人.
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